क्लोन को अलग करना
सामान्य तौर पर, एक विशेष जीन या ब्याज के डीएनए अनुक्रम के क्लोन को प्राप्त करने के लिए क्लोनिंग की जाती है। इसलिए, क्लोनिंग के बाद अगला कदम पुस्तकालय के अन्य सदस्यों के बीच उस क्लोन को खोजना और अलग करना है। यदि पुस्तकालय किसी जीव के पूरे जीनोम को समाहित करता है, तो उस पुस्तकालय के भीतर कहीं वांछित क्लोन होगा। संबंधित जीन के आधार पर, इसे खोजने के कई तरीके हैं। आमतौर पर, एक क्लोन डीएनए सेगमेंट जो मांगी गई जीन को होमोलॉजी दिखाता है, एक जांच के रूप में उपयोग किया जाता है। उदाहरण के लिए, यदि एक माउस जीन पहले से ही क्लोन किया गया है, तो उस क्लोन का उपयोग मानव जीनोमिक लाइब्रेरी से समकक्ष मानव क्लोन को खोजने के लिए किया जा सकता है। लाइब्रेरी बनाने वाली बैक्टीरियल कॉलोनियों को पेट्री डिश के संग्रह में उगाया जाता है। फिर एक छिद्रपूर्ण झिल्ली को प्रत्येक प्लेट की सतह पर रखा जाता है, और कोशिकाएं झिल्ली का पालन करती हैं। कोशिकाएं फट जाती हैं, और डीएनए एकल स्ट्रैंड्स में विभाजित हो जाता है - सभी झिल्ली पर। जांच को एकल किस्में में भी अलग किया जाता है और लेबल किया जाता है, अक्सर रेडियोधर्मी फॉस्फोरस के साथ। रेडियोधर्मी जांच का एक समाधान तब झिल्ली को स्नान करने के लिए उपयोग किया जाता है। एकल-फंसे हुए जांच डीएनए केवल उस क्लोन के डीएनए का पालन करेगा जिसमें समान जीन होता है। झिल्ली को सुखाया जाता है और विकिरण-संवेदनशील फिल्म की शीट के खिलाफ रखा जाता है, और कहीं न कहीं फिल्मों पर एक काला धब्बा दिखाई देगा, जो वांछित क्लोन की उपस्थिति और स्थान की घोषणा करता है। क्लोन को फिर मूल पेट्री व्यंजनों से पुनर्प्राप्त किया जा सकता है।
आनुवंशिकी: पुनः संयोजक डीएनए प्रौद्योगिकी और पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया
आनुवांशिक समझ को आगे बढ़ाने में तकनीकी प्रगति ने महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है। 1970 में अमेरिकी माइक्रोबायोलॉजिस्ट डैनियल नाथन
डीएनए श्रृंखला बनाना
एक बार जब डीएनए का एक खंड क्लोन किया गया है, तो इसका न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम निर्धारित किया जा सकता है। न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम जीन या जीनोम के ज्ञान का सबसे मौलिक स्तर है। यह एक ऐसा खाका है जिसमें किसी जीव के निर्माण के निर्देश हैं, और आनुवांशिक कार्य या विकास की कोई भी समझ इस जानकारी को प्राप्त किए बिना पूरी नहीं हो सकती है।
उपयोग
डीएनए सेगमेंट के अनुक्रम के ज्ञान के कई उपयोग हैं, और कुछ उदाहरणों का पालन करते हैं। सबसे पहले, इसका उपयोग जीन को खोजने के लिए किया जा सकता है, डीएनए के खंड जो एक विशिष्ट प्रोटीन या फेनोटाइप के लिए कोड करते हैं। यदि डीएनए के एक क्षेत्र को अनुक्रमित किया गया है, तो इसे जीन की विशिष्ट विशेषताओं के लिए जांचा जा सकता है। उदाहरण के लिए, ओपन रीडिंग फ्रेम (ओआरएफ) - लंबे क्रम जो एक शुरुआत कोडन (तीन आसन्न न्यूक्लियोटाइड्स के साथ शुरू होते हैं; एक कोडन का अनुक्रम अमीनो एसिड उत्पादन को निर्धारित करता है) और स्टॉप कोडन (उनकी समाप्ति पर एक को छोड़कर) द्वारा निर्बाध हैं - एक के बाद एक प्रोटीन-कोडिंग क्षेत्र। इसके अलावा, मानव जीन आम तौर पर तथाकथित CpG द्वीपों से सटे होते हैं - साइटोसिन और गुआनिन के समूह, दो न्यूक्लियोटाइड जो डीएनए बनाते हैं। यदि किसी ज्ञात फेनोटाइप (जैसे मनुष्यों में एक बीमारी जीन) के साथ एक जीन को गुणसूत्र क्षेत्र में क्रमबद्ध होने के लिए जाना जाता है, तो उस क्षेत्र में बिना जीन वाले जीन उस कार्य के लिए उम्मीदवार बन जाएंगे। प्रजातियों के भीतर और दोनों के बीच विकासवादी रिश्तों की साजिश करने के लिए विभिन्न जीवों के घरेलू डीएनए अनुक्रमों की तुलना की जा सकती है। तीसरा, कार्यात्मक क्षेत्रों के लिए एक जीन अनुक्रम की जांच की जा सकती है। एक जीन के कार्य को निर्धारित करने के लिए, विभिन्न डोमेन की पहचान की जा सकती है जो समान फ़ंक्शन के प्रोटीन के लिए सामान्य हैं। उदाहरण के लिए, एक जीन के भीतर कुछ अमीनो एसिड अनुक्रम हमेशा प्रोटीन में पाए जाते हैं जो एक कोशिका झिल्ली को फैलाते हैं; ऐसे अमीनो एसिड स्ट्रेच को ट्रांसमेम्ब्रेन डोमेन कहा जाता है। यदि एक ट्रांसमेंब्रेनर डोमेन अज्ञात फ़ंक्शन के जीन में पाया जाता है, तो यह बताता है कि एन्कोडेड प्रोटीन सेलुलर झिल्ली में स्थित है। अन्य डोमेन डीएनए-बाध्यकारी प्रोटीन की विशेषता रखते हैं। डीएनए अनुक्रमों के कई सार्वजनिक डेटाबेस किसी भी इच्छुक व्यक्ति द्वारा विश्लेषण के लिए उपलब्ध हैं।
